白癜风有好的治疗方法吗 https://m-mip.39.net/nk/mipso_6329464.html大家好，今天给大家分享的文章是发表在JOURNALOFENZYMEINHIBITIONANDMEDICINALCHEMISTRY上面的文章，文章题目为：Stronginhibitoryactivitiesandactionmodesoflipopeptidesonlipase通讯作者为Mei-chunChen。
据报道，脂肽具有抑制脂肪酶从而起到抗肥胖的作用，但是其具体的影响机理还不太清楚。本文作者通过对一株能够产生三种脂肽的菌株进行性质鉴定与分析，探究了这三种脂肽抑制脂肪酶的机制。
在本篇文章中，作者从土壤样品中分离到一株产脂肽的菌株FJAT-，并通过全基因组序列分析对其进行了准确鉴定。菌株FJAT-的基因组序列为bp(GenBank登录号:CP)。菌株FJAT-的染色体DNAGtC含量为46.5mol。FJAT-菌株和芽胞杆菌CBMBTwas菌株之间的正交性计算的基于基因组的相似性为99.95%。该值高于用于描述原核生物物种的95-96%的阈值ANI值，表明菌株FJAT-是该物种的菌株。
表1绒毛芽孢杆菌FJAT-产生的脂肽的LC-QTOF-MS/MS鉴定
用液相色谱四极杆飞行时间串联质谱(LC-QTOF-MS/MS)方法对菌株FJAT-产生的脂肽进行了鉴定。结果表明，保留时间分别为12.2-21.5、27.0-38.7和45.2-54.0min的三组同源分子可分别被归类为伊图里素、风霉素和表面肌动蛋白。根据以前的文献报道，确定了各脂肽组的肽序列。对保留时间、MS和MS2光谱数据以及鉴定结果进行了总结，如表1所示：伊图里由C14–C16伊图里组成；表面肌动蛋白由C12-C16表面肌动蛋白A和C16表面肌动蛋白A衍生物组成；此外，风霉素由C16/C18风霉素A、C16风霉素A2/B2、C16–C17风霉素B和C15风霉素A/B衍生物组成。上清液中的伊图里素、风霉素和表面肌动蛋白含量分别为2.66±1.50、86.95±4.08和35.93±2.28毫克/升。结果表明，风霉素是菌株FJAT-产生的最丰富的脂肽家族。
图1用80%甲醇洗脱的馏分的全扫描液相色谱-电喷雾质谱图
菌株FJAT-的粗脂肽经固相萃取法进一步纯化，用液质联用仪进行鉴定。结果表明，通过用80%甲醇洗脱获得了粗脂肽中纯化的风霉素(图1)，而使用上述方法未能成功纯化粗脂肽中的伊图里素和表面肌动蛋白。液相色谱-质谱分析显示，FJAT-的粗脂肽产量中伊图里素和表面肌动蛋白的组成与伊图里素和表面肌动蛋白标准相同。因此，在进一步的研究中，伊图里素和风霉素标准被用来替代相应的物质。
图2(A)粗脂肽、(B)纯化的丰霉素、(C)伊图里素和(D)表面肌动蛋白的脂肪酶抑制活性
文献报道，由于表面肌动蛋白的特殊性质，在一定浓度下可以抑制脂肪酶活性。来自芽孢杆菌组的脂肽已被证明是优良的表面活性剂，可降低四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠血浆中的脂肪酶活性。尽管如此，脂肽与脂肪酶的相互作用方式以及酶抑制的机制仍不清楚。在本研究中，作者报道了粗脂肽(图2(A))、纯化的风霉素(图2(B))、伊图里素(图2(C))和表面肌动蛋白(图2D))标准对脂肪酶的影响。米黑的脂肪酶和人胰脂肪酶都是丝氨酸蛋白酶，具有相同的活性位点和催化模式。此外，从米黑的脂肪酶具有更高的酶活，较好的纯度和比人类胰腺脂肪酶更成熟的过程。因此，本研究选择了米黑脂肪酶。结果表明，脂肪酶抑制呈剂量依赖性。添加这四种抑制剂后，相对酶活性随效应剂浓度的增加而显著降低。
图3(A)粗脂肽、(B)风霉素和(C)表面肌动蛋白对脂肪酶的抑制机制
作者另外研究了脂肽、风霉素和表面肌动蛋白对脂肪酶的催化作用。如图3所示，所有剩余酶活性与酶浓度的曲线都产生了一系列相交于原点的直线，其斜率随着脂肽含量的增加而减小。这些结果表明上述催化作用是可逆的，即脂肽降低了脂肪酶的催化活性，但并没有导致酶失活。研究表明，观察到的抑制剂最常见的作用机制是可逆的，如糠酸和草酸，其他如奥利司他的作用是不可逆的。
图4在(A)没有粗脂肽和(B)有粗脂肽存在的情况下，在脂肪酶催化过程中获得的连续光谱。曲线1-10描绘了在10分钟内添加酶的情况
测定了粗脂肽缺乏(图4(A))和存在(图4(B))时脂肪酶催化的紫外光谱。结果表明，随着催化反应时间的延长，产物在nm处的典型吸收峰强度增大。10min后，在0.mg/mL脂肽存在下，峰吸光度降低到54.5%，表明FJAT-可产生粗脂肽是一种更强的抑制剂，此结果与酶活性测定结果一致。
图5脂肽对脂肪酶发射光谱的影响。(A)粗脂肽浓度分别为0.、0.、0.、0.、0.、0.和0.mg/mL(分别为1-7)的脂肪酶的发射光谱；(B)荧光强度随脂肽的变化；(C)脂肽的F0F与的关系图；(D)脂肽的Lg[(F0F)/F]与Lg的关系图
脂肪酶粗脂肽的荧光发射光谱如图5所示。结果表明，随着脂肽含量的增加，在nm处发射峰的荧光强度逐渐降低(图5(AB));这表明脂肽和脂肪酶形成一个络合物。不同浓度的脂肽对脂肪酶的影响并没有导致内源性荧光峰红移或蓝移;这表明酶分子的组成并没有完全改变，酶仍然是活性的。绘制F0/F与的曲线，得到F0/F?1t0.的线性回归方程(图5(C))。根据Stern-Volmer方程，发现Stern-Volmer淬火常数ksvv值为0.L/g。该值大于生物大分子的最大动态猝灭常数(L/mol);这说明当脂肽存在时，脂肪酶的荧光猝灭机制是静态的33。由图5(D)得到线性回归方程。根据上述方程的截距和斜率计算得到结合常数ka1和结合位点n分别为1.L/g和0.78。这说明脂肪酶与脂肽的相互作用十分强烈，两者之间只有一个结合位点。
文章表明了FJAT-的脂肽分为伊图里素、风霉素和表面肌动蛋白，粗脂肽、伊图里素、风霉素和表面肌动蛋白对脂肪酶有较强的抑制作用，且呈剂量依赖性。脂肽抑制催化反应是可逆的，抑制类型是竞争性的。风霉素和表面肌动蛋白直接与酶活性中心的残基相互作用，而伊图里素则不会。风霉素是粗脂肽中含量最高的化合物，被认为是抑制脂肪酶活性的重要因素，提示了这些脂肽可直接作为脂肪酶抑制剂使用。
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